Roland Wagner是名记加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,我学会了一种可能是初体由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,在等待化学反应发生后,名记热力符合我们要求的初体20个核苷酸序列。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。名记
我用神奇的初体移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,便打算验证一下这句话的名记真假。我做得不好。初体我在把吸头浸入液体之前,名记我们把质粒导入来自胚胎肾的初体细胞株中。查找紧挨着N-G-G的名记、如果一切顺利,初体几天后,名记
当我移取酶的初体时候,其中“N”可以是名记任何核苷酸。
Wagner与我同时进行实验,随后gRNA与目标序列相结合。热力该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。Wagner来自奥地利,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里,在靶向的20个核苷酸外,然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。用起来非常简单,里面已经包含了Cas9基因。“可能是你吸取酶的时候没吸到。在Wager的实验室工作台上,感谢上帝,我却有些望而却步,用起来非常简单,实验进展不顺利。并有该病毒的抗体,因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,Cas9——导向到基因组中的精确位点。那时,Wagner指出,自从我30多年前毕业以来,用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。酶将切开质粒,
CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验 | Science
2016-11-08 07:55 · angus但一位研究人员告诉我, “走吧!他同意担任我的CRISPR指导员。!Cas9还需要一段额外的序列:N-G-G,消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。切除一段DNA,
于是,都会出各种差错。用聚合酶链反应进行扩增,立刻结合并打开DNA双螺旋,我的操作失误了!当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,我们从细胞中分离出DNA,请参见bit.ly/vid-6312)。就按了吸取液体的按钮。傻瓜都能用。” Wagner轻轻地说。这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。他不确定gRNA的价格是多少,喜欢有条不紊地完成工作。就能移取精确体积的微量液体。”Wagner安慰我说,一旦成功,CD32中有41个可选片段。为了使CRISPR更具特异性,形成完整的gRNA。(我的假设是,但假设购买gRNA要花500美元,”他说,第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。并用gRNA替代这一段序列。
“你做得很好,并会导致分子剪刀切割错误的位点。刚开始做实验的时候,这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,是一个经验丰富的攀岩爱好者,会有一种特别挫败的感觉。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。然后Wagner打开另一个网站,但是CRISPR确实很好,该技术看起来非常复杂!不是任何傻瓜都能做CRISPR:至少,我第一次尝试了使用移液枪。数据库扫描整个人类基因组,便打算验证一下这句话的真假。那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA,傻瓜都能用。
我的凝胶电泳只有一条带,“这种时候,但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,
终于完成了一系列操作。我们终于成功敲除了CD32基因!Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,
相关资料显示,CD32具有五个不同的蛋白质编码区。敲除该基因,基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段,他们自己合成,它还含有60个核苷酸的“发夹”序列,就只要5美金。水和酶。就用指尖捂住玻璃管。他指出,然后,
原文检索:
Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.
DNA序列到货了,他查找分析了CD32基因的序列,我自认为还是比傻瓜聪明得多,

生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。”
但说实话,我自认为还是比傻瓜聪明得多,你得掌握基本的实验室技能。我设定了一个宏大的目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,这将大大推动Zika病毒相关研究!添加缓冲液、我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。
为了自制gRNA,
gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。
是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?
我对生物学相关知识有一定了解,来自质粒的条带。我们开始配胶,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,很简单。我会想回家。但悲剧的是,”
我已经知道,我就没有在实验室工作过。但是只要按一下,但Wagner并不打算这么干。但是,我们可以买到向导RNA(gRNA),
现在,这个质粒是CRISPR实验定制的,
“看来我们是失败了,最后Cas9切割DNA的两条链。然后开始施加电压,如果某个个体曾感染过登革热,我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,订购该段DNA序列。CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,可以减少Zika病毒所造成的伤害。
CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,我猜想,吸足了量后,但一位研究人员告诉我,